作业帮微生物实验中培养基的配置应该注意什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 04:09:08
微生物实验中培养基的配置应该注意什么?
微生物实验中培养基的配置应该注意什么?
微生物实验中培养基的配置应该注意什么?
1、常用玻璃仪器的准备
制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净,晾干后备用.
（1）平皿用纸或布包好,或装在金属盒内,于121℃高压蒸汽菌3min后烘干,备用.
（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好,再用布或报纸包扎好,121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干,备用.
（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出,或橡皮帽内的气体污染）,然后用纸包后或装入金属吸管筒内,于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干,备用.其他玻璃器皿均应按上法处理,也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后,备用.
2、培养基的制备及储存
（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内.加入蒸馏水,隔水加热以促其溶解,加热时应经常搅拌,防止焦结,待其溶解后补足水分.
在使用干燥培养基时,先将蒸馏水按定量加入容器中,然后称取一定量培养基干粉放入水中,静置10—15min,搅拌,振荡,或延长时间以促进溶解,一般不要热,必要时加热,但时间不宜过长,温度不宜过高,避免某些营养成分被破坏.
（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH.因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一,测定pH的标准温度为25士2℃.调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液.当调节缓冲液的pH时,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液.灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低,一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右,灭菌后基本合适.因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定,并记下每次pH的测定结果,有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性,从而指导灭菌前pH的调节.干燥培养基一般已校正过pH,用时也必须再验证.测定时,一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化,或用pH计校正,如与所需pH不符,可用以上的酸或碱液加以校正.调整pH后要加热过滤,使培养基澄清.
（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认.每次使用前后,均要对分配器的管道系统进行冲洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管.
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压灭菌后根据需要分装平皿或试管.
平皿：倾注平皿,应在无菌室中放置3—4h,如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min.让水蒸汽自然蒸发.
斜面：制备低层斜面分装于试管,约占容积1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染.
高层斜面：制备高层斜面分装于试管,约占试管容积的1/3,灭菌后趁热放置成高层短斜面,待其凝固后应用.
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内最佳）进行灭菌处理.液体、半固体培养基一般在高压灭前分装,约装试管容积的1/3,在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基,灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中.
培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定.普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min,但容器和装量较大时,应延长至20min.含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min.含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,连续3d,间歇灭菌.血清或组织液,采用低热56—58水浴1h,连续5—6d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤除菌.高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到全部杀灭微生物.以上的灭菌时间和温度要经过验证确认,如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好.